Spin-off Professor Layton série mění nejenom hlavní prostagonisty, ale i celkovou hratelnost. Hlavní dvojice protagonistů je Lucy Baker a inspektor Alfendi Layton, syn Herschela Laytona. Detektivní pár pracuje ve slovutném Scotland Yardu v oddělení přezdívaném jako Mystery Room. Společnými silami vyšetřují kriminální případy, které nemají jednoduchá řešení.

Hra se zaměřuje zejména na detektivní hratelnost místo velkého množství hádanek, kterými jsou hlavní díly známé. Budete tak provádět ohledání místa činu, sbírání důkazů, rozhovory s podezřelými a výsledné dedukování, kdo byl pachatelem činu. Hra vám v průběhu případu neustále pokládá otázky na různé skutečnosti, na které je nutné správně odpovědět,

Layton Brothers: Mystery Room vyšlo ve formátu free to play. Prolog a první dva případy je možné hrát zdarma, dalších sedm případu je nabízeno za peněžní poplatek.